laebio：Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 貨號(hào)：K003

描述:
該檢測試劑盒包含用于藥物篩選目的的I型拓?fù)洚悩?gòu)酶活性常規(guī)檢測的試劑。人拓?fù)洚悩?gòu)酶I (topoI)是喜樹堿和其他“拓?fù)洚悩?gòu)酶I毒物"的細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)，其中一些是迄今為止鑒定的很有希望的抗癌藥物。Topo I藥物篩選試劑盒具有巨大的價(jià)值，因?yàn)樗鼘⒛軌蚝侠砗Y選新的抗癌化合物，有朝一日可能用于減輕被診斷患有癌癥的人的痛苦。包括DNA標(biāo)記以允許清楚地檢測酶。該檢測對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有特異性。強(qiáng)烈建議將活性人拓?fù)洚悩?gòu)酶I(目錄號(hào)P005)與該試劑盒一起使用。

應(yīng)用:

• 體外研究超螺旋對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響。
• 體外研究染色質(zhì)重建。
• 確定自然發(fā)生的DNA的超螺旋程度。
• 檢測長度僅相差一個(gè)堿基對(duì)的突變質(zhì)粒。
• 通過解螺旋DNA以暴露限制性位點(diǎn)來增加抗性DNA底物的限制性內(nèi)切酶消化。
• 抗癌藥篩選。

質(zhì)量控制測試:

1. 通過分析線性KDNA和線性質(zhì)粒DNA的形成來進(jìn)行核酸酶污染的測試。用KDNA或超螺旋pGEM 5Z DNA孵育(4 hrs. at 37^oC in the presence of 10 mM MgCl₂)被執(zhí)行。在這些條件下不會(huì)產(chǎn)生線性DNA或分解產(chǎn)物。
2. Topo II交叉污染檢查為陰性。在topo II反應(yīng)條件下，KDNA不能脫去。

套件內(nèi)容:

• 超螺旋質(zhì)粒底物DNA對(duì)照(目錄號(hào)D001，

  100微升

  LAE1DNA，0.2微克/微升，適用于100次標(biāo)準(zhǔn)檢測)。
• 松弛的質(zhì)粒DNA標(biāo)記物(cat# D002，100 ul預(yù)松弛的pLAE1 DNA，由Topo I以0.04 ug/ul的濃度在凝膠加載緩沖液中制備，適用于20種標(biāo)準(zhǔn)分析)。
• 5X Topo I反應(yīng)緩沖液(目錄號(hào)B001，500微升，適用于100種標(biāo)準(zhǔn)檢測)。
• Topo I停止緩沖液/凝膠加載染料(目錄號(hào)B002，500微升，適用于100種標(biāo)準(zhǔn)檢測)。
• 對(duì)照抑制劑(目錄# B003，喜樹堿；凍干)。

檢測條件:

• 建議在最終體積為10微升的Topo I反應(yīng)緩沖液(40 mM Tris-Cl，pH 7.5，100 mM NaCl或KCl，10mM MgCl)中使用5單位的Topo I活性物質(zhì)(目錄號(hào)P005)進(jìn)行松弛試驗(yàn)

  ₂

  、0.5 mM EDTA、30微克/毫升BSA)。
• 標(biāo)準(zhǔn)分析:超螺旋質(zhì)粒DNA(目錄號(hào)D001)以0.2微克/反應(yīng)使用。用5微升(在10微升反應(yīng)體積中)終止緩沖液(5% sarkosyl，0.0025%溴酚藍(lán)，25%甘油)終止反應(yīng)。然后可以在0.8%天然瓊脂糖凝膠上分析反應(yīng)產(chǎn)物。
• 每個(gè)泳道加載5 ul (0.2 ug)松弛的質(zhì)粒DNA標(biāo)記(目錄號(hào)D002)作為對(duì)照。

運(yùn)輸/儲(chǔ)存:
該套件在環(huán)境溫度下運(yùn)輸，應(yīng)在-20℃下儲(chǔ)存^oC.

僅供研究使用。

一個(gè)單位的topo I與0.2微克pGEM 5Z DNA在37℃孵育30分鐘^oC.

上海牧榮生物科技有限公司

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